細胞的生長、發育、分化及代謝狀態和外界細胞因子、炎癥介質反應等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發生浸潤、轉移等現象的分子基礎。細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞染色探針W16染色粘附的活細胞數量來反應細胞的粘附能力變化。...

細胞粘附檢測試劑盒

 

產品編號：HR8260

產品組成：

細胞粘附檢測試劑盒儲存條件：

2-8℃保存；染色液開蓋后2-8℃避光保存，長期不用-20℃避光保存。有效期1年。

產品簡介：

細胞粘附是指細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質之間的粘附，細胞粘附是細胞維持形態結構與功能的生物現象，是細胞間信息交流的一種形式。而信息交流的可溶遞質稱細胞粘附分子(cell adhesion molecule,CAM)。細胞粘附分子是參與細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質之間相互作用的分子。 是一類獨立的分子結構，是通過識別與其粘附的特異性受體而發生相互間的粘附現象。

細胞的生長、發育、分化及代謝狀態和外界細胞因子、炎癥介質反應等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發生浸潤、轉移等現象的分子基礎。

細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞染色探針W16染色粘附的活細胞數量來反應細胞的粘附能力變化。

本試劑盒不含有包被液。本試劑盒使用比色法進行檢測，如果需要熒光法檢測的，請選用我公司貨號為HR8258的試劑盒。

本試劑盒適合進行常規的總體粘附性能的檢測。不含有包被劑，如果需要含包被劑的，可以選用我公司貨號為HR0957的試劑盒。

產品特點：

● 方便：可用酶標儀檢測；

● 快速：最快1小時內即可完成實驗；

● 靈敏：數據可靠，重現性好，線性范圍更寬；

● 準確：試劑本身穩定性高，實驗結果穩定可靠。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 酶標儀 ● 離心機 ● 移液器 ● Matrigel/Fibronectin,Fn ● PBS或者HBSS

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。

● 染色培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間。培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔(100μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔(100μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入染色液B。

● 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，會干擾O.D值讀數。

● OD值在0.4-2.0之間均可，最大值控制在1.0左右為宜，小于0.4或大于2.0請調整接種量和培養時間。

細胞粘附檢測試劑盒使用方法：

包被：

1、根據細胞類型，96孔板每孔加入100μL Matrigel或Fibronectin包被液。

2、將培養板置2-8℃過夜。

3、移除包被液。

4、用洗滌液洗滌1-3次。

細胞接種：

1、待測定細胞處理好后，用胰酶消化，PBS洗滌，然后用相應培養基重懸，制成細胞懸液。

2、按5×10⁴細胞/孔接種96孔板，建議設3-5個復孔。同時設立對照組，即孵育后不棄上清組。

3、放37℃培養箱孵育30分鐘-1小時。

4、取出培養板，吸棄培養基。

【注】：

● 對照孔培養基不要吸除。

5、然后用相應的培養基洗滌2-3次。

6、每孔加入100μL新鮮培養基。

粘附率檢測：

1、96孔板每孔加入10μL細胞染色液B。

2、37℃孵育30分鐘-4小時。

【注】：

● 不同細胞需要孵育的時間差異較大，需要摸索最佳孵育時間，一般孵育30分鐘后拿出培養板檢測對照細胞孔的450nm 的OD值，達到0.8-1.0即可。

3、測定樣品孔OD值。測定450 nm 各孔的吸光值，如無450nm濾光片，可以使用450-490nm的濾光片。

4、細胞粘附率計算。

將各測試孔的OD值減去空白孔(未加細胞孔)OD值。各重復孔的OD值取平均數。

細胞粘附率% =((待測細胞OD-空白OD)/(對照細胞OD-空白OD))×100

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