本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。...

細菌裂解液(免超聲)

 

產品編號：HR0275

產品組成：

細菌裂解液(免超聲)儲存條件：

裂解液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋前也可以2-8℃保存，開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

產品簡介：

細菌裂解液采用優質原料配制，用于細菌菌體的裂解，用于細菌蛋白提取，裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western等下游實驗。

本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本裂解液中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本裂解液提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用我司其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（貨號HR0389）。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 如果試劑盒不能短時間用完，蛋白酶抑制劑混合物不可一次全部加入提取液。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、裂解液的準備：

根據所需提取的樣本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

2、在4℃,10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3、用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。

4、按每50-100mg濕重菌體樣本加入500μL裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 如果沒有低溫振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

5、在4℃ 10000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。

6、即得到細菌蛋白樣品。

7、將細菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA方法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

細菌裂解液(免超聲)常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford 法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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