O12 ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質，綠色熒光強度與組織內活性氧水平成正比，檢測O12產物的熒光就可以知道組織內活性氧的水平。O系列活性氧探針具有多種顏色可以選擇，可根據情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑盒的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色熒光的活性氧檢測試劑盒。...

組織活性氧(ROS)檢測試劑盒(O12)

 

產品編號：HR8820

產品組成：

組織活性氧(ROS)檢測試劑盒(O12)儲存條件：

勻漿液2-8℃保存；探針-20℃避光保存。有效期1年。

【注】：

● 探針長期不用可以-20℃保存，避免反復凍融。

● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

產品說明：

本產品是一種利用新型熒光探針O12進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的O12 ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/526nm的最大激發/發射波長。

O12 ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質，綠色熒光強度與組織內活性氧水平成正比，檢測O12產物的熒光就可以知道組織內活性氧的水平。

O系列活性氧探針具有多種顏色可以選擇，可根據情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑盒的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色熒光的活性氧檢測試劑盒。

在激發波長488 nm，發射波長526 nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標儀、等檢測O12產物熒光，從而測定組織內活性氧水平。

本試劑盒可以用于各種動物和植物樣本的檢測。

本試劑盒只可以用于新鮮組織樣本的活性氧檢測，不可以用于凍存的組織樣本的活性氧檢測。

以每個組織樣本50mg計，本試劑盒小包裝可以染色100個樣本。

產品特點：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；
● 線性范圍寬，使用方便。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光光度計或熒光酶標儀,激發波長488nm,發射波長526±10nm,或者按照FITC熒光檢測條件檢測

● 離心機 ● 移液器 ● PBS 緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅） ● 熒光專用黑色96孔板

組織活性氧(ROS)檢測試劑盒(O12)使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● O12染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

使用方法：

試劑準備：

根據樣本數量，用純水將O12探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現配現用。

樣本處理：

1、剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

2、準確稱取50mg貨100mg組織樣本，加入500μL-1mL勻漿緩沖液A，用玻璃勻漿器充分勻漿。

3、在1000×g，4℃離心10分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL O12探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

【注】：

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據預實驗結果調整探針用量。一般加入2-10μL探針，染色總濃度按試劑盒探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數樣本。

● 如果熒光強度太強，超過了檢測儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。

● 以酶標儀檢測為例，也可以用熒光分光光度計檢測，根據所使用儀器決定勻漿液體積和染色容器。

2、在37℃避光孵育20-30分鐘。

3、置于酶標儀中，后于激發波長為488nm、發射波長526nm檢測熒光強度。

【注】：

● 或使用熒光光度計等其他熒光檢測設備。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

● 如果熒光強度太強，超過了檢測儀器的量程，可以將孵育后的勻漿上清液用純水稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。保證所有樣本稀釋倍數一致即可。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋20-30倍。

2、取100μL進行蛋白定量，測定蛋白濃度（mg/ml）。

結果處理：

以熒光強度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強度。

【注】：

● 數據與蛋白濃度的單位無關。

● 此處以蛋白濃度數據作為校正系數，對不同樣品進行均一化。

● 熒光強度強則活性氧含量高。

● 可以用實驗中對照樣本的熒光強度值為基準，待測組樣本的熒光強度值占對照樣本的百分比來比較活性氧程度差異。

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