HR0233-50T 動(dòng)物線粒體提取試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0233-50T 動(dòng)物線粒體提取試劑盒
- 型 號(hào)：HR0233-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：981
本試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的線粒體提取。最好用于新鮮樣品的線粒體提取，由于冷凍樣品的線粒體在凍存過(guò)程中可能被破壞，提取回收率可能大幅降低。本試劑盒提取的線粒體可以用于各種線粒體功能研究、蛋白提取等下游應(yīng)用。...
動(dòng)物線粒體提取試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：HR0233
產(chǎn)品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
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組份A：線粒體提取液A |
50mL |
100mL |
|
組份B：線粒體提取液B |
25mL |
50mL |
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組份C：線粒體保存液C |
25mL |
50mL |
|
說(shuō)明書 |
1份 |
1份 |
儲(chǔ)存條件：
2-8℃保存，長(zhǎng)期不用可以-20℃保存，有效期1年。
動(dòng)物線粒體提取試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
線粒體(mitochondria)是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行最終的氧化，并通過(guò)偶聯(lián)磷酸化生成ATP，供給細(xì)胞生理活動(dòng)之需。對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進(jìn)行的，本試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可在40 分鐘內(nèi)提取得到線粒體。
本試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的線粒體提取。最好用于新鮮樣品的線粒體提取，由于冷凍樣品的線粒體在凍存過(guò)程中可能被破壞，提取回收率可能大幅降低。
本試劑盒提取的線粒體可以用于各種線粒體功能研究、蛋白提取等下游應(yīng)用。
適用樣本：
● 組織 ● 細(xì)胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 移液器 ● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液
注意事項(xiàng)：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
● 最好使用標(biāo)準(zhǔn)Dounce勻漿器勻漿，如果沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)Dounce勻漿器，用普通1mL玻璃勻漿器勻漿也可，但是線粒體回收率會(huì)下降。
使用方法：
細(xì)胞線粒體提取：
1、取1-2×107個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞；
2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 用1000×g力離心5分鐘。
3、細(xì)胞沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A重懸，置冰上5分鐘。
4、用 Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。
● 每上下一個(gè)來(lái)回為一次。
5、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。
6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。
9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。
10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。
【注】：
● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。
● 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
動(dòng)物線粒體提取試劑盒組織線粒體提取：
1、取50-100mg新鮮動(dòng)物組織樣本，用PBS洗滌干凈。
2、用手術(shù)剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
【注】：
● 用1000×g里離心5分鐘。
3、沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A混勻，置冰上5分鐘。
4、用Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。
● 每上下一個(gè)來(lái)回為一次。
5、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。
6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。
9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。
10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。
【注】：
● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。
● 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
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